分享一下布美诺肽合成的具体步骤

　　布美诺肽为环七肽结构。大量研究已证实它们的受体分子在性唤起、降低食欲以及催化黑色素的合成中起着重要的作用，由此可以治疗性功能障碍、肥胖以及刺激皮肤产生黑皮素抵抗紫外线灼伤等疾病。
 

　　布美诺肽合成具体步骤如下：
 

　　一：取CTC树脂，加DCM充分溶胀后，称取Fmoc-Lys(Boc)-OH加DMF溶解，冰浴下滴加2~3eq的DIEA活化后转入树脂中，7~10min后补加1eq的DIEA，继续反应2h后，洗涤，加甲醇/DCM/DIEA封闭液封闭两次，洗涤抽干，测量取代值。
 

　　二：将第一步树脂投入反应柱中，加DCM溶胀，加20%PIP/DMF脱除Fmoc，DMF和DCM交替洗涤，用茚三酮检测，结果应呈阳性；DMF/DCM=3/1作为反应溶剂，加Fmoc-Trp(Boc)-OH、HOBT溶解后，加入DIEA，10~10℃条件下下加入HBTU活化10min；活化后转入反应柱中，常温下反应1h，用DMF和DCM洗涤，用茚三酮检测，结果应呈阴性；反应结束后，按照脱保护、洗涤、缩合循环进入下一步氨基酸的缩合,缩合的保护氨基酸依次为:Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-D-Phe-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Nle-OH；偶联完成后脱除N末端Fmoc保护基，加乙酰化试剂封端，甲醇收缩，抽干。
 

　　三：按1g树脂配置10ml全保护裂解液(1%~2%TFA/DCM或20%~30%TFE/DCM)，冰浴条件下加入树脂，开启搅拌；树脂加入后撤去冰浴，恢复室温反应1h。反应结束，过滤，树脂用DCM洗涤两次，合并滤液；向滤液中加入DIEA调溶液PH值至8-9，旋蒸拉干，加入预冷10%甲醇/水溶液沉淀，离心，打浆洗涤，抽干。
 

　　四：取上一步产物，加THF溶解，加入甲醇、三苯基膦溶解，通氮气保护，冰浴下滴加DEAD，滴加完成后，撤去冰浴，恢复室温反应4h。反应结束，旋蒸除去THF，加入MTBE析出，离心，打浆洗涤，抽干。
 

　　五：取上一步产物，按1g产品10ml的比例加入裂解液(TFA:Tis:H2O:苯酚=92.5:2.5:2.5:2.5:2.5)，室温反应1h。反应结束，加入预冷MTBE沉淀，离心，打浆洗涤，抽干。
 

　　六：取上一步产物，加DMF溶解，加HOBT和DIEA活化，冰浴下滴加DIC，滴加完成，撤去冰浴，恢复室温反应3h。反应结束，加入预冷MTBE沉淀，离心，打浆洗涤，抽干。
 

　　七：取上一步产物，加80%ACN水溶液溶解，加1mol/L的NaOH水溶液调PH至10，常温下搅拌反应2h；反应结束后，加冰醋酸调PH至3，旋蒸除去ACN，加入MTBE析出，离心，打浆洗涤，抽干。用35%ACN水溶液溶解，钛棒过滤后进行HPLC纯化。